關于Tn5轉座酶的原理介紹
更新時間:2022-09-15 點擊次數:1268次
RNA測序(RNA-Seq)是基于二代測序技術開展轉錄組學研究過程中廣泛使用的一種方法,能夠在特定時間點對生物樣本中的多種RNA進行定性和定量分析。針對RNA測序的常規建庫方法都需要先將RNA轉換為雙鏈DNA,且需經過目標RNA富集及片段化、雙鏈DNA合成、接頭連接、PCR擴增等多個步驟。
Tn5轉座酶復合體因能一步打斷雙鏈DNA并且使DNA兩端帶上接頭,而廣泛應用于二代測序建庫等領域。近期也有研究發現,Tn5轉座酶同樣能以類似的方式作用于RNA/DNA雜合鏈,從而能夠省去傳統RNA建庫技術中的RNA片段化、二鏈合成等繁瑣的操作步驟,進一步拓展了Tn5轉座酶的新用途。此外,Tn5轉座酶也被廣泛用于體外轉基因(外源基因整合到宿主細胞)等各領域。
執行轉座功能的酶,通常由轉座子編碼,識別轉座子兩端的特異序列,能把轉座子從相鄰序列中脫離出來,再插入到新的DNA靶位點,無同源性要求。
EZ-Tn5™轉座酶具有較高的Tn5轉座活性。是高純度,單亞基的酶,可隨機插入EZ-Tn5至任何靶向DNA,每個標準反應插入DNA克隆的量為>106,當用EZ-Tn5轉座子在沒有鎂離子孵育時,形成穩定的EZ-Tn5轉座子復合體,特定的認識自然發生的Tn5和微小的Tn5轉座反應和使EZ-Tn5轉座子具有高活性的端端序列。