簡單介紹哺乳動物蛋白表達的定義
更新時間:2022-11-27 點擊次數:850次
蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。一般由以下幾個部分組成:宿主表達蛋白的生物體??梢詾榧毦?、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同,適合表達蛋白的種類也不相同。載體載體的種類與宿主相匹配。根據宿主不同,分為原核(細菌)表達載體、酵母表達載體、植物表達載體、哺乳動物表達載體、昆蟲表達載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導,外源基因可以在宿主中表達。輔助成分有的表達系統中還包括了協助載體進入宿主的輔助成分。比如昆蟲-桿狀病毒表達體系中的桿狀病毒。
哺乳動物蛋白表達系統的優勢能實現翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復性:哺乳動物為真核細胞,細胞器可以對蛋白正確折疊加工。表達水平高:載體可在哺乳動物細胞中高表達重組蛋白,表達量可高達1-3g/L蛋白表達高效穩定:高效啟動子控制,穩定表達,并可以選擇多種表達系統選項:瞬時表達、穩定細胞株表達、營養缺陷型細胞株表達(DHFR/GS)、大規模懸浮細胞表達等適合大規模蛋白表達:常用的哺乳動物表達宿主細胞(HEK293和CHO),使用懸浮細胞培養,可以在一個月內可產生數克級蛋白。
當然哺乳動物表達系統也有它的劣勢:曾經,使用哺乳動物細胞表達重組蛋白質的最大問題是是效率低,所表達的蛋白質水平低。然而,諸如HEK293和CHO的細胞系已經分別被開發為有效的瞬時和穩定表達系統。方法原理是使用脂質體、磷酸鈣或PEG作為轉染試劑瞬時轉染HEK293細胞。雖然瞬態表達相對容易和簡單,但擴大規模卻在技術上存在挑戰性。CHO細胞通常用于穩定表達大量重組蛋白。